1、母种培养：1、麦芽糖酵母琼脂培养基（MYA）大豆蛋白胨（豆胨）1克、酵母2克、麦芽糖20克、琼脂20克，加水至1000毫升。2、马铃薯葡萄糖酵母琼脂培养基（PDYA）马铃薯300克（加水1500毫升，煮20分钟，用滤汁）、酵母2克、豆胨1克、葡萄糖10克、琼脂20克，加水至1000毫升。3、燕麦粉麦芽糖酵母琼脂培养基（DMYA）燕麦粉80克、麦芽糖10克、酵母2克、琼脂20克，加水至1000毫升。
2、原种和栽培种培养基：1、小麦秆或裸麦秆，切碎（长2—3厘米），泡湿，装瓶，高压灭菌后备用。2、小麦、裸麦，高粱、玉米、小米等谷粒浸泡，煮透至没有白芯但表皮不破，加2%碳酸钙，装瓶，高压灭菌后备用。3、木屑和小木片各40%、麸皮20%，制作栽培种培养基。
3、接种：可以用培养3—4天的液体菌种接种。若用固体菌种必须加大接种量（菌种/培养料），接种量最少10%，最好15%—20%。
4、培养：接种后，把菌种瓶或袋放在20—28℃培养室中培养。大球盖菇菌丝生长几天后，菌丝生长速度会逐渐缓慢，加速菌丝生长的方法是搅拌。用液体菌种接种的无菌麦粒培养基，每隔3—7天摇瓶一次，把菌丝摇断，可以刺激菌丝再生，能保证菌丝生长旺盛。
